无尘室沉降菌测试标准操作规程
无尘室沉降菌测试标准操作规程
无尘室主要之作用在于控制产品(如硅芯片等)所接触之大气的洁净度日及溫湿度，使产品能在一个良好之环境空间中生 产、制造，此空间我们称之为洁净室。
一、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。
二、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定无尘室的洁净度。
三、所用的仪器和设备
1、高压消毒锅：使用时参照文件ZJ-JC-SOP-066-00进行操作。
2、恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
3、培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。
四、培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。
五、测试步骤
1、采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。
2、培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。
3、菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
六、注意事项
1、测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
2、采取一切措施防止人为对样本的污染。
3、对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4、由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
5、采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
七、测试规则
1）测试状态
1、沉降菌测试前：被测试无尘室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、必须控制在规定值内。被测试无尘室（区）已消毒。
2、测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。
3、测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
2）测试时间
（1）对单向流，如100级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
8沉降菌计数
1）采样点数目：可按表1确定。在满足*少测点数的同时，还宜满足*少培养皿数，见表2。
表1 *少采样点数目
面积(m2) |
洁净度级别 |
|||
100 |
10000 |
100000 |
300000 |
|
＜10 |
2～3 |
2 |
2 |
2 |
≥10～＜20 |
4 |
2 |
2 |
2 |
≥20～＜40 |
8 |
2 |
2 |
2 |
≥40～＜100 |
16 |
4 |
2 |
2 |
≥100～＜200 |
40 |
10 |
3 |
3 |
注：表中的面积对于单向流无尘室是指送风面积，对于非单向流无尘室是指房间面积。
表2 *少培养皿数
洁净度级别 |
所需Φ90mm培养皿数（以沉降0.5小时计） |
100 |
14 |
10000 |
2 |
100000 |
2 |
300000 |
2 |
2、采样点的布置：工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。
3、记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。
4、结果计算：用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的计算见下式：m1+m2+……+mn平均菌落数m=n式中：m为平均菌落数；m1为1号培养皿菌落数；m2为2号培养皿菌落数；mn为n号培养皿菌落数；n为培养皿总数。
5、结果评定：用平均菌落数判断无尘室的空气中的微生物。
6）无尘室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准（见表3）。
表3
洁净级别 |
100级 |
10000级 |
100000级 |
300000级 |
标准（平均） |
1个/皿 |
3个/皿 |
10个/皿 |
15个/皿 |
7、若某无尘室（区）的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
8、万级无尘室生产车间按生产工艺和产品质量要求，分为一般生产区、控制区和。设人员换鞋区、男女一、二次更衣室、洗手、手消毒、洗衣间、风淋室通道、洁净人流走廊、物流货淋走道、注塑间、胶垫吹尘、中储库、组装间、内包装间、外包装间及机房、物流等。机房需做隔音防震处理;设备运行负荷符合楼板承重要求。
人员流动方向：换鞋、更衣、洗手、手消毒–风淋通道–洁净走廊–洁净车间在走廊设安全门，便于人员疏散。物品流动方向：物流通道——洁净车间——–成品包装。
